PCR是一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR的基础上，加入荧光标记的探针或相应的荧光染料来实现其定量功能。其原理是随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断积累，荧光信号强度成比例增加；每次循环后采集荧光强度信号，通过荧光强度的变化监测产物量的变化，从而得到荧光扩增曲线。

　　

　1、液体准备。荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、酶和冻干保护剂按配方混合，冻干保护剂的选择非常重要。常见的冻干保护剂包括糖类、多元醇、聚合物、表面活性剂、氨基酸、盐类等。一种可冻干的保护剂通常含有一种以上的保护剂，但也可以组合使用多种保护剂。然而，冻干保护剂配方的探索是一个耗时的过程，也是冻干成功的关键。

　　

　　2、冷冻干燥。准备好上述可冻干反应试剂，分装成PCR八管或定制PCR管，然后放入PCR分子冻干机，开始整个冻干过程。冷冻干燥过程通常分为三个不同的阶段：预冷冻阶段、初级干燥阶段和次级干燥阶段。在预冻阶段，温度一般在-50～-40℃保持2-3H。预冻后，保持冻干机内温度不变，开始抽真空至5-10pa，保持10-20h。升华后，将冻干机内部温度升至-35~-25℃并在真空下保持1-2h，然后继续将冻干机内部温度升至-5~5℃并保持1-真空下2h。最后，在真空下继续将冻干机内部温度升至25-35℃，保持10-12h。冻干后可通入氮气，然后按下塞子即可完成整个冻干操作。冻干法制备的荧光PCR试剂可在室温避光保存。它性质稳定，易于运输和使用。使用时只需加入溶解液或稀释剂即可。

　　

　　PCR分子冻干机采用不锈钢板设计，保证箱体表面光洁度，从而保证无菌要求。所设计的板层强度高，可保证在长期使用过程中对压盖无渗漏、变形和影响。板层通过机械加工可以保证对平整度要求高，平整度好，冻干箱板层温度均匀性好。板层控制温度-55～70℃，控制温度范围宽，加热和冷却温度可控，效率高。冷阱的极限温度≤-85℃，可对-50以上的任何共晶点进行冻干，适用范围广，对低共晶点温度的分子试剂更安全。